菌种怎么制作，菌种保藏方法

1、种植时间：通常可以在每年夏季的5-6月或者秋季的9月种植菌菇。2、种植：用锄头在松树（自然生长25年以上）的根部处挖出1道行沟，接着撒种覆膜。3、日常管理：因为在松树下种植的菌菇通常可以吸收自然养分以及水分，因此一般不需要浇水或者施肥，但需要在种植地附近撒上一层石灰粉，防止蚂蚁等动物污染菌菇。

1、方法：准备好镊子、EP管、枪头等工具，并进行杀菌处理；手和镊子用酒精擦拭消毒，用镊子取出约10支的EP管放到试剂盒里；找到移液枪，取出50%的甘油（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）放到EP管里面，再取出菌种放到EP管里面；最后把所有的菌种都装入到一个大袋子里盖好盖子标注好保存起来，放入-20℃的冰箱里保存。2、温度要求：长期保存，建议在-70℃下冻存；短期保存，可在-20℃保存。

首先将用来制作菌种的枝条剪成小段，放在消毒池内，压盖好加入清水没过枝条。泡透后再加入少量的生石灰，直到pH值呈现偏碱性为止。制作时一定不要使用培养基已干缩或老化的一级种，以免影响菌种的成活率或导致生产性状退化。启用保藏的一级种时，应认真检查是否有污染现象。

醋酸菌的菌种的主要来源为：自然环境、人工收集菌株并筛选、人工购置生产用的菌种。醋酸菌是一种重要的工业用菌，它是一种原核生物，以二分裂的形式来进行增殖，自然界中的醋酸菌分布得比较广泛，一般在果园的土壤中、葡萄或酸败的食物表面以及未经过灭菌的醋、果酒、啤酒中都有生长。

实验室内短期保存菌种的可用方法是培养基直接保存法。其它保存方法：将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物为原料制成的孢子培养物置于4℃内的冰箱内保存即可，但是其保存时间一般不会超过1-2个月。

1、纯菌种：选择新鲜、皮薄、肉白、质紧、有香味的成熟茯苓菌核作菌种制作纯菌种，待白色菌丝长满斜面时，即为纯种。2、母种：配方为马铃薯250g、蔗糖50g、琼脂20g、尿素3g、水1000ml。3、原种：母纯种培养成功后，还不能直接用于生产，应扩大繁殖培养原种。4、栽培种：配方为松木块66%、松木屑10%、麦麸或细糠21%、葡萄糖2%、石膏粉1%、尿素0.4%、过磷酸钙1%，加水适量。

以冷冻干燥法为例，可将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）进行混合，然后将其放入安瓿管内，并将安瓿管放在零下20°C至零下30℃的乙醇液中速冻；速冻后在低温的情况下用真空泵将乙醇液抽干，并用五氧化二磷或干冰将水汽结冻，最后熔封安瓿管并将它放置于低温下保存即可。

栽培时不用母种作菌种，一般是因为母种的生产成本较高，如果直接用于栽培，需要量较大。把母种转入与栽培料接近的营养基质上会得到第2级种，叫做原种，把原种再接入相同的培养基内叫3级种，也叫生产种或栽培种，这种菌种能直接用于生产。菌种需要丰富的营养物质，不同的蘑菇需要的无机盐等微量元素有一些区别。

菌种保存的方法有斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、滤纸保藏法、甘油管保存法、冷冻干燥保存法。1、斜面低温保藏法：将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。2、液体石蜡覆盖保藏法：使用液体石蜡将斜面菌覆盖住，使其和空气隔绝。

1、常用配方：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂10-20g、水1000ml。2、制作方法：将马铃薯去皮洗净，切成小块煮至熟而不烂，过滤加水至1000ml；将琼脂剪成小段，放入锅内，边搅边煮，溶化后加入葡萄糖；装管前取一小勺浮在凉水中冷却观察其硬度适合然后分袋试管，用棉花塞塞住试管口，进行灭菌；采用组织分离法，通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种；经过10天左右菌丝长满瓶，母种即制作成功。