菌种保藏的目的，菌种保藏的方法有哪些

一、菌种保藏的目的

1、目的

在使用和传代的过程中，菌种容易出现污染，发生变异，死亡等情况，从而导致菌种衰退，优良菌种丢失。而菌种保藏的目的就是为了尽可能的保持菌种的原有性状以及活力的稳定，保证菌种不死亡、不发生变异、不会被外物污染，保持菌株的优良性状不发生退化以及优良菌株的存活。

2、原理

菌种保藏的原理是通过降低微生物体内的代谢，抑制生长繁殖，从而延长菌种的生命，减少变异。常用的方法主要为低温保藏，缺氧保藏，干燥保藏。除此之外，避光，添加保护剂，缺乏营养等也可以提高保藏的效果。

二、菌种保藏的方法有哪些

1、斜面低温保藏法

将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，等到菌种充分生长过后，使用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。

2、液体石蜡保藏法

（1）使用三角烧瓶将液体石蜡装好，塞上棉塞，并用牛皮纸进行包扎，0.1MPa，121.3℃灭菌30分钟左右，然后转移至40℃的温箱中，将水汽蒸发掉。

（2）将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后使用灭菌吸管将石蜡注入斜面上，用量为高出斜面顶端1cm为宜。

（3）将试管直立，放置在低温或者室温的环境下进行保存。

3、滤纸保藏法

（1）准备好滤纸条（0.5×1.2cm），装入安瓿管中（0.6×8cm），每个管中放入1-2张，然后塞上棉塞，在0.1MPa，121.3℃的环境下灭菌30分钟。

（2）将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后取出1-2ml的灭菌脱脂牛乳，滴加在灭菌培养皿内，接着取数环菌苔在牛乳内混合均匀，制成浓悬液。

（3）使用镊子将滤纸条夹出，浸入菌悬液内，吸饱后，放回安瓿管中，塞上棉塞。

（4）将安瓿管放入装有五氧化二磷的干燥器，并用真空泵抽气至干，然后将棉花塞入管内，用火焰熔封，放置在低温下保存。

（5）当需要使用菌种的时候，将安瓿管口在火焰上烧热，在烧热的部位滴上一滴冷水，使玻璃破裂，再用镊子将瓶口端的玻璃敲掉，等到打开安瓿管后，将滤纸取出，放入液体培养基内，置温箱中培养。

4、沙土保藏法

（1）取出河沙，加入10%稀盐酸，加热煮沸30分钟（除去有机质）。

（2）将酸水倒掉，并用自来水将河沙洗至中性，然后进行烘干，过筛（40目筛子），将粗颗粒去掉。

（3）取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，浸泡洗涤数次，直至为中性。

（4）烘干，碾碎，过筛（100目筛子），去除粗颗粒。

（5）将沙和土按照2：1的比例混合，装入试管中，塞好棉塞，灭菌30分钟左右。

（6）将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后向斜面培养物中注入3-5ml无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。

（7）用无菌吸管吸取菌悬液，均匀滴入沙土管中，每管0.2-0.5ml，然后真空抽去管中的水分。如果是放线菌和霉菌可以直接挑取孢子拌入沙土管之中。

（8）将沙土管用火焰熔封，然后放置在低温（4-6℃）干燥处保藏，或者是将沙土管直接用牛皮纸或塑料纸包好，置干燥器内保存。保存过程中，需要每隔半年检查一次菌种的存活性和纯度。

5、甘油管保存法

（1）将80%的甘油进行高压蒸汽灭菌。

（2）将菌种放置在斜面培养基上培养，然后使用无菌水制成高浓度的菌悬液。

（3）使用1ml的甘油与菌液混合均匀，让甘油的浓度为10-30%左右，然后将其放置在零下70℃的环境下进行冻存。

（4）也可以使用甘油-生理盐水（体积比8：2），和菌体肉汤混合均匀，然后放置在零下20℃的环境下进行保存。

6、冷冻干燥保藏法

（1）在低温下将细胞快速冻结，然后在真空条件下进行干燥，同时为了保证细胞在冷冻和水分升华的过程中不受损害，应当使用保护剂来制备细胞细胞悬液（菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质），通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

（2）干燥后的菌种在真空下封装，和空气隔绝，从而实现长期保藏。

（3）该方法兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除开丝状真菌的菌丝体外，其它各类微生物大多都适用。