菌种保藏的原理，菌种保藏方法

1、种植时间：通常可以在每年夏季的5-6月或者秋季的9月种植菌菇。2、种植：用锄头在松树（自然生长25年以上）的根部处挖出1道行沟，接着撒种覆膜。3、日常管理：因为在松树下种植的菌菇通常可以吸收自然养分以及水分，因此一般不需要浇水或者施肥，但需要在种植地附近撒上一层石灰粉，防止蚂蚁等动物污染菌菇。

1、食用菌菌种的概念：食用菌指子实体硕大、可供食用的蕈菌（大型真菌）。2、食用菌菌种的分级：在生产上，一般将食用菌分为三级，分别是一级种（母种、试管种）、二级种（原种）和三级种（栽培种）。3、食用菌菌种保存使用最多的方法：在生产中，食用菌菌种保存使用最多、最常用的方法是斜面低温保存法，它具有应用方便、操作简单、无需特殊设备以及能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等优点。

蘑菇菌种的制作，通常分为母种、原种和栽培种3个层次。其中，母种培养基制作方法为：通过组织分离技术，将选取的大球盖菇组织块接入1号培养基上，在24-28℃条件下经10-15天培养，菌丝长至试管1/3-1/4时，挑取菌丝扩展前端浓密、粗壮的部分转入2号或3号培养基上，采用两点接种法，以使菌丝迅速长满培养基表面，即成（生产）母种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种相同。

1、方法：准备好镊子、EP管、枪头等工具，并进行杀菌处理；手和镊子用酒精擦拭消毒，用镊子取出约10支的EP管放到试剂盒里；找到移液枪，取出50%的甘油（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）放到EP管里面，再取出菌种放到EP管里面；最后把所有的菌种都装入到一个大袋子里盖好盖子标注好保存起来，放入-20℃的冰箱里保存。2、温度要求：长期保存，建议在-70℃下冻存；短期保存，可在-20℃保存。

1、生活污水培菌法：选在温暖的季节，往曝气池里注入污水并闷曝曝气池数十小时，随后再往里面开始进水，水量由小到大，一般连续运行一段时间后便可以看见活性污泥了。2、干泥接种培菌法：先把干污泥作为菌种源，随后用适量的水将干泥捣烂之后再加入工业废水和粪便水，接着再过段时间便能看见活性污泥。

将废菌包外包裹的塑料膜撕去，用破碎机破碎成小块状，将破碎后的废菌渣堆在简易大棚内的地面上。堆料过程中向废菌渣喷洒少量水，此过程中废菌渣的温度为75-80°C左右。再用重量百分比为50％的食用菌废料混合50％酶渣堆成条堆，用翻抛机混合均匀，加上菌种进行发酵即可。

1、建立菇房：选择地势高、平坦、开阔、背风向阳的地方建立菇房。

2、养料配制：配制养料的成分有家畜粪便、麦草、麸皮、花生壳等，将其晒干或切断，混合适量的石膏，用水或尿浸透，再一层草料一层粪便堆起来发酵。

3、消毒杀菌：对菇房和养料进行消毒杀菌处理。

4、接种处理：将养料放在菇床上整平，用穴播的方式接种。

5、出菇管理：做好水分和温度管理。

实验室内短期保存菌种的可用方法是培养基直接保存法。其它保存方法：将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物为原料制成的孢子培养物置于4℃内的冰箱内保存即可，但是其保存时间一般不会超过1-2个月。

菌种分离的一般过程为采样、富集、分离、筛选目的菌。培养基与菌种分离是指从含有多种微生物的样品中获得纯种微生物的操作技术，该过程主要是在培养皿上进行，常用的方法为稀释法和划线法。

将用于制作菌种的枝条切成小段，摆放在消毒池内，压盖好后注入清水，直至没过枝条，泡透后加入少量的生石灰，直至PH值呈现为偏碱性，再将枝条沥去水分装入聚丙烯菌种袋，每袋装100根左右，将袋子放于高压锅内蒸煮3-10个小时进行高压灭菌，放凉后进行接种，最后将菌袋放于恒温室内的菌架上，保持适宜的温度即可。